二氧化碳搖床(CO?搖床)是一種結合恒溫搖床和CO?氣體控制的培養設備,主要用于細胞培養、微生物發酵等需要精確控制溫度、濕度和氣體環境的實驗。以下是一個詳細的應用方案,涵蓋設備選擇、操作流程、應用場景及注意事項:
一、設備選擇與配置
1. 基礎功能要求
溫度控制:范圍通常為室溫+5℃至50℃,精度±0.1℃。
CO?控制:濃度范圍0 20%,精度±0.1%,需配備紅外或熱導傳感器。
濕度控制:可選配濕度模塊(維持>90% RH,防止培養液蒸發)。
振蕩功能:轉速范圍50 300 rpm,可調振幅(通常3 50mm),支持圓周或線性振蕩。
滅菌方式:內腔需耐腐蝕(不銹鋼材質),支持高溫濕熱滅菌(如121℃)或紫外線消毒。
2. 推薦品牌與型號
Thermo Scientific(如Forma Series)
Eppendorf(New Brunswick S41i)
Binder(CB系列)
二、典型應用場景
1. 哺乳動物細胞培養
應用:懸浮細胞(如CHO、HEK293)或貼壁細胞(需專用培養瓶)。
參數:37℃、5% CO?、80 120 rpm,維持pH穩定(依賴CO?/HCO??緩沖體系)。
2. 微生物發酵與蛋白表達
應用:大腸桿菌、酵母等重組蛋白表達,需優化溶氧(通過轉速調節)。
參數:30 37℃、0 5% CO?(根據菌種需求)、150 250 rpm。
3. 3D細胞培養與類器官研究
應用:腫瘤球體、腸道類器官培養,需低轉速(50 80 rpm)減少剪切力。
4. 缺氧/低氧條件模擬
擴展功能:搭配O?控制器(如1% O?、5% CO?、94% N?),研究腫瘤微環境。
三、操作流程(以細胞培養為例)
1. 前期準備
消毒:用70%乙醇擦拭內腔,或運行高溫滅菌程序。
校準:定期校準CO?傳感器(使用標準氣體)。
2. 參數設置
設定溫度(如37℃)、CO?濃度(5%)、轉速(100 rpm)。
預熱至穩定狀態(約30分鐘)。
3. 樣品放置
使用透氣蓋培養瓶或密封瓶(需平衡CO?滲透率)。
液體體積不超過容器1/3,避免濺出。
4. 運行監控
實時監測溫度、CO?波動,記錄日志。
定期檢查培養液pH(應為7.2 7.4)。
5. 結束處理
關閉CO?氣源,待濃度降至0%后再開門,防止CO?驟降導致培養液pH飆升。
四、注意事項
1. 安全與維護
氣瓶壓力需穩定(建議使用雙氣瓶自動切換系統)。
防止污染:定期更換HEPA過濾器(如有),避免冷凝水積聚。
2. 常見問題解決
CO?波動大:檢查氣密性、傳感器是否失效。
轉速不穩定:檢查電機或皮帶磨損。
3. 特殊需求適配
高濕度需求:放置水盤或使用濕度控制模塊。
無氧環境:需定制氮氣置換功能。
五、擴展應用案例
疫苗開發:用于病毒載體擴增(如腺病毒),優化細胞密度與感染效率。
腸道微生物研究:模擬腸道厭氧環境,培養厭氧菌群。
通過合理配置參數和嚴格操作,二氧化碳搖床可顯著提高細胞或微生物的培養效率,尤其適用于需要動態混合與氣體控制的研究場景。根據實驗需求選擇功能模塊(如光照、多參數監測)可進一步擴展其應用范圍。
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